BL21(DE3)化学转化感受态
BL21(DE3) 化学转化感受态细胞产品简介 BL21(DE3) 感受态细胞适用于无毒异源基因的表达。该菌株含有受lacUV5启动子控制的T7 RNA聚合酶基
BL21(DE3) 化学转化感受态细胞产品简介 BL21(DE3) 感受态细胞适用于无毒异源基因的表达。该菌株含有受lacUV5启动子控制的T7 RNA聚合酶基
产品简介
BL21(DE3) 感受态细胞适用于无毒异源基因的表达。该菌株含有受lacUV5启动子控制的T7 RNA聚合酶基因(λDE3),可实现IPTG诱导的T7 RNA聚合酶表达。BL21(DE3)是一种大肠杆菌B菌株,不含lon蛋白酶。其也缺乏外膜蛋白酶OmpT。不存在这两种关键蛋白酶可降低细胞中表达的异源蛋白的降解。转化效率超过107 cfu/μg DNA,可以用于pET等系列质粒的蛋白高效表达。
产品规格
品名 | 规格 |
BL21(DE3)化学感受态 | 10×100 μL |
50×100 μL |
-基因型:F-ompT hsdSB (rB-mB-) gal dcm (DE3)
保存条件
-80℃保存;请勿将本品置于-20℃或者液氮中保存。
转化方法
1. 解冻感受态细胞:从-80℃取感受态细胞,放置在冰浴或冰水浴中融化,约5-10 min,放置时间过长会影响转化效率。
2. DNA样品的转化:每100 μL感受态加入待转化DNA样品(例如质粒、连接产物或重组产物等)约10 μL,然后轻轻弹击管底约2-3次,立即冰上静置孵育30 min。
3. 热激处理:将冰浴后的离心管快速置于42℃水浴中,静置热激90 s。随后立即转移至冰水浴中静置2-3 min以快速冷却。
4. 复苏培养:加入900 μL 37℃预热的LB或SOC培养基,颠倒数次混匀,37℃摇床约220 rpm复苏培养45 min。
5. 收菌涂板:如果用于质粒的转化扩增,建议直接取50-100 μL进行涂板即可;如果用于连接产物或重组产物的转化,建议先5000 g,1 min室温离心沉淀细菌,吸除约900-950 μL上清,然后用剩余的约50-100 μL菌液重悬,涂布到含相应抗生素的LB平板上。
6. 过夜培养:将平板倒置放于37℃培养箱培养过夜。
注意事项
- 加入待转化DNA样品体积通常不宜超过感受态细胞体积的10%。
- 加入待转化DNA样品后应轻柔操作,避免使用移液枪吹打混匀。
- 如果用于质粒的转化扩增,冰浴静置约10 min后可以直接涂板并培养过夜;如果用于连接产物或重组产物的转化,建议冰浴静置30分钟并严格执行后续的热激处理和复苏培养等步骤,以提高转化效率。
- 热激及转移至冰浴过程中请勿晃动离心管。
- 培养前需要将平板在超净台中稍微晾至无明显水渍,有利于形成单克隆。