PfAgo 核酸内切酶
PfAgo 核酸内切酶（PfAgo Endonuclease ）来源于重组大肠杆菌，含有从激烈火球菌（Pyrococcus furiosus） 中克隆的 Argonaute（Ago）核酸酶基因，是一种依托引导序列（guide DNA）与靶核酸碱基互补配对，继而特 异识别并剪切靶核酸的核酸内切酶。
PfAgo 核酸内切酶
产品信息
| 产品名称：PfAgo Endonuclease | 规格：200 U |
产品概述
PfAgo 核酸内切酶（PfAgo Endonuclease ）来源于重组大肠杆菌，含有从激烈火球菌（Pyrococcus furiosus） 中克隆的 Argonaute（Ago）核酸酶基因，是一种依托引导序列（guide DNA）与靶核酸碱基互补配对，继而特 异识别并剪切靶核酸的核酸内切酶。PfAgo 核酸内切酶在 5’ 磷酸化的 guide DNA（大于 15 nt）引导下精准剪 切单链 DNA 底物，剪切位点位于与引导序列互补的 5’端开始的第 10 和 11 个核苷酸之间，剪切不受靶标序列 和剪切位点相邻序列限制。
产品组分
| 组分 | 体积 | 数量 |
| PfAgo Endonuclease（100 U/mg） | 400μL | 1 支 |
| PfAgo Endonuclease Reaction Buffer（10x） | 1 mL | 1 支 |
热稳定
95℃ 1 小时，酶活性不损失。
运输与保存方法
-20℃及以下运输及保存，长期保存建议放-80℃。
效期
-20℃及以下 24 个月。
单位定义
95 ℃反应条件下，每分钟催化 0.1 nmol 靶序列核酸所需的 PfAgo 量，定义为 1 个酶活力单位(U)。
质量控制
| 项目 | 标准 | 方法 |
| 产品外观 | 澄清透明 | 目视检查 |
| 活性 | 标示值 | 荧光定量 PCR 法 |
| 纯度 | ≥ 90% | 中国药典 2020 版第四部 SDS-PAGE 法（通则 0541） |
| 核酸内切酶残留 | 无检出 | 20 U 酶与 pUC19 DNA 底物 37℃孵育 1 小时，用 1%的琼脂糖电泳检测，底物无降解。 |
| 核酸外切酶残留 | 无检出 | 20 U 酶与 ssDNA 底物 37℃孵育 1 小时，用 16%尿 素变形电泳检测，底物无降解。 |
| 宿主 DNA 残留 | < 10 拷贝/0.5μg 酶 | 荧光定量 PCR 法 |
实验流程
体外切割单链 DNA 操作方法：
1. 按顺序配置反应体系
| 试剂 | 体积 |
| 10 μM ssDNA | 2 μL |
| 10 μM guide DNA | 4 μL |
| 40 mM Mn2+ | 1 μL |
| Reaction Buffer(10×) | 2 μL |
| PfAgo（200 U/μL） | 4 μL |
| Nuclease-free H2O | up to 20 μL |
▲一般使用 20 μL 体系，但也可以等比例放大。
▲实验前请根据使用说明用无核酸酶水将 ssDNA 与 guide DNA 稀释到相应浓度。
▲请使用无核酸酶水的耗材与试剂。
2. 95℃孵育 30 min。
3. 反应产物可直接进行核酸胶电泳分析。
▲ 如果不立即电泳，可以加入 EDTA 终止反应。
结果图示
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酶活检测电泳图 | 酶活检测曲线图 |
自备材料
试剂：40 mM Mn2+、Nuclease-free H2O
guide DNA（序列 5’P-TTTGGAGCTGGTGGCG 3’）
ss DNA（序列 5’ 6-FAM-CCTACGCCACCAGCTCCAACTACCACAA-BHQ1 3’ ）
仪器：PCR 仪器（ABI7500、 QuantStudio 5、Stepone plus）、金属浴或水浴锅 RNase free EP 管.
