AapCas12b(C2c1)
AapCas12b(又名C2c1)来源于嗜酸耐热菌Alicyclobacillus acidophilus，是一种依赖于crRNA和tracrRNA共同介导的(或融合后的sgRNA单独介导的)DNA核酸内切酶。
AapCas12b(又名C2c1)来源于嗜酸耐热菌Alicyclobacillus acidophilus，是一种依赖于crRNA和tracrRNA共同介导的(或融合后的sgRNA单独介导的)DNA核酸内切酶。在靶标双链DNA存在PAM (TTN) 序列的情况下，剪切反应温度可达60～65℃。在靶标双链DNA存在PAM(5'-TTN-3')的情况下，可特异地剪切靶标双链DNA，使DNA双链断裂并生成粘性末端。而AapCas12b特异地剪切单链DNA靶标不依赖PAM序列。此外，双链或单链DNA靶标均能激活AapCas12b的反式剪切活性(即旁路剪切活性/附属剪切活性)，即当AapCas12b酶与sgRNA、靶标DNA结合形成三元复合物后，便会被激活针对非特异序列ssDNA的反式剪切活性，可无差别地剪切反应体系中任意序列的ssDNA。AapCas12b比AacCas12b 。因此，也更适用于与LAMP联用，开发"一管法"恒温扩增/CRISPR-Cas检测体系。
gRNA/gRNA 与 Cas12b 结合，形成功能复合物，被目标 序列特异性激活。
AapCas12b(C2c1) sgRNA scaffold sequence 结构序列为: 5'- GUCUAGAGGACAGAAUUUUUCAACGGGUGUGCCAAUG GCCACUUUCCAGGUGGCAAAGCCCGUUGAGCUUCUCAA AUCUGAGAAGUGGCAC -3'
组分 | E0808H1 (100 pmol) | E0808H3(1,000 pmol) |
AapCas12b(C2c1) Nuclease (10 μM) | 100 pmol | 1,000 pmol |
10 × AapCas12b(C2c1) Reaction Buffer | 1 mL | 1 mL |
AapCas12b(C2c1) Nuclease 1000 pmol规格的浓度为10 μM，即10 pmol/μL，1000 pmol规格的总体积为100 μL
名称 | 推荐用量/终浓度 | 优化范围 |
10 × Cas12b Reaction Buffer | 1 × | - |
Reporter (fluorescence） | 200 nM | 100 ~ 500 nM |
sgRNA | 500 nM | 400 ~ 600 nM |
AapCas12b(C2c1) 蛋白 | 300 nM | 200 ~ 600 nM |
上一步反应的扩增产物 | 适量 | 0-5ul |
H2O | 补齐到 20 μL | - |
组分-20℃储存；≤ 0℃运输。
