• 登录
社交账号登录

LwaCas13a(C2c2)

产品概述LwaCas13a(又名C2c2)是依赖于crRNA单独介导的RNA内切核酸酶,来源于_Leptotrichia wadei_菌株。可特异地识别并剪切靶

1150
规格P: 100 pmoL 1000 pmoL
数量:
货号:E0803H1      *大包装订购及定制,请电询

产品概述

LwaCas13a(又名C2c2)是依赖于crRNA单独介导的RNA内切核酸酶,来源于_Leptotrichia wadei_菌株。可特异地识别并剪切靶标单链RNA,且对PFS序列的要求并不严格。此外,Cas13a也具有反式剪切活性(即旁路剪切活性/附属剪切活性),即当LwaCas13a蛋白与crRNA、靶标RNA结合形成三元复合物后,便会被激活针对非特异序列单链RNA的反式剪切活性,将体系中的任意序列单链RNA切碎。该活性可被用于核酸的检测开发。


crRNA/gRNA:与Cas13a 结合,形成功能复合物,被目标序列特异性激活。

LwaCas13a crRNA scaffold sequence 结构序列:  5'-GAUUUAGACUACCCCAAAAACGAAGGGGACUAAAA-3'


产品组分

组分

E0803H1 (100 pmol)

E0803H3(1,000 pmol)

LwaCas13a Nuclease (10 μM) 

100 pmol

1,000 pmol

10 × LwaCas13a Reaction Buffer

1 mL

1 mL

LwaCas12a Nuclease 1000 pmol规格的浓度为10 μM,即10 pmol/μL,1000 pmol规格的总体积为100 μL

保存条件

-20℃储存;≤ 0℃运输。


实验案例

1.LwaCas13a的反式剪切:本实验中包含LwaCas13a、crRNA,以及不同浓度梯度的target RNA,并在剪切反应体系中加入等量的ssRNA报告探针,该探针5′端标记荧光报告基团(FAM),3′端标记荧光淬灭基团(BHQ1)。实验结果表明,LwaCas13a在crRNA引导下与特异靶标ssRNA形成三元复合物后,便会被激活针对ssRNA的反式剪切活性,剪切体系中的ssRNA报告探针并发出荧光信号。靶标RNA浓度越高,体系反式剪切ssRNA报告探针的速度更快,释放的荧光信号到达平台期的时间越短。

 

图1:不同浓度梯度ssRNA靶标存在下LwaCas13a的反式剪切结果。

实验流程

1.反式切割实验

组分

体积 

终浓度 

10 × LwaCas13a Reaction Buffer<

2 μL1 ×

10 μM LwaCas13a Nuclease

0.05~0.5 μL25~250 nM

10 μM crRNA

0.05~0.5 μL25~250 nM

10 μM Target RNA

0.05~0.5 μL25~250 nM

10 μM ssRNA Reporter (FAM-BHQ1) 

0.05~0.5 μL25~250 nM

Nuclease-free water

Up to 20 μL 

◆ 反式剪切体系中各组分的用量可以根据不同的实验目的进行调整,用量较少时可先将各组分稀释后加入体系,LwaCas13a Nuclease可用1 × LwaCas13a Reaction Buffer稀释,稀释后需立即使用(若要稀释后的Cas13酶长期保存,请使用Cas13 Dilution Buffer,crRNA、Target RNA及ssRNA Reporter可用Nuclease-free Water稀释,但极低浓度的Target RNA(例如LOD实验)建议用0.1% Tween

◆ 实时荧光定量PCR仪检测荧光信号,37℃反应,每30 sec采集一次荧光信号。


如何设计LwaCas13a的crRNA?

LwaCas13a的crRNA可参照以下序列设计:
5′-GAUUUAGACUACCCCAAAAACGAAGGGGACUAAAACNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN-3′,(前一部分为direct repeat区,下划线标示crRNA与特异靶标序列互补配对的spacer区,建议spacer区长度为28 nt)。


产品推荐