环状DNA验证: Sanger测序
环状DNA验证: Sanger测序
环状DNA验证: Sanger测序
针对测序项目中筛选出的环状DNA，云序提供sanger测序服务验证环状结构。通过设计反向引物进行PCR扩增，验证连接位点处序列。通过反式PCR扩增出来的产物，将覆盖环状DNA连接位点的扩增产物进行sanger测序，精确证实连接位点。通过sanger低通量测序，一方面更加严谨地核实了所挑选出的环状的连接位点，第二方面验证了高通量测序和分析识别环状DNA的准确性，第三方面可以确认某些高通量测到表达量较低的环状确实存在。
实验方法
1. PCR 扩增
2. 琼脂糖电泳及胶回收
3. Sanger 测序及结果分析
样本要求
样品类型：
组织、细胞、血清血浆或DNA样品。
样品量：
a）细胞：2×107
b）组织：200mg
c）血清血浆：5mL
d）DNA：>=10 μg，溶于无菌水或 TE（PH = 8）（OD 260/280值应在1.7～2.0 之间；RNA 应该去除干净；不得有其它个体或其它物种的DNA污染）。
样品运输及保存：
样品运输：样品置于1.5mL Eppendorf管中，封口膜封好，干冰运输，DNA可用冰袋运输。
样品保存：细胞样品或新鲜组织块切块，液氮冻存后-80℃保存；DNA样品短期内可-20℃，避免反复冻融。
数据展示
1. 环状DNA特异性的junction位点分析
