Stbl4电击转化感受态细胞W
Stbl4 电击转化感受态细胞 产品简介Stbl4 菌株来源于 Stbl2 E. coli strain，可用于慢病毒载体或逆转录病毒载体的构建。Stbl4
Stbl4 电击转化感受态细胞
产品简介
Stbl4 菌株来源于 Stbl2 E. coli strain，可用于慢病毒载体或逆转录病毒载体的构建。Stbl4 菌株适合克隆不稳定插入片段 (正向重复序列，逆转录病毒序列等)；mcrA 突变和 mcrBC-hsd RMS-mrr deletion 使该菌株更适于克隆甲基化的基 因组序列。recA 1 和 endA1 的突变有利于克隆 DNA 的稳定和高纯度质粒 DNA 的提取。lacIqZΔM15 标记使得 Stbl4 菌株可用于蓝、白斑筛选，此菌株具有四环素抗性。唯地生物生产的 Stbl4 电击感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19 质粒（2686bp，AmpR）检测转化效率>0.5×1010 cfu/μg DNA，特别适合慢病毒质粒文库或逆转录质粒文库的构建。
产品规格（CAT#：DE1047）
Stbl4 Electroporation-Competent Cell 50μl /支
pUC19 (control vector, 10pg/μl) 10μl
保存条件（保质期）： -80℃（6 个月）
基因型
F′ proAB+ lacIqZ?M15 Tn10 (TetR)mcrA ?(mcrBC-hsdRMS-mrr) recA1 endA1 gyrA96 gal- thi-1 supE44 λ- relA1?(lac- proAB)
操作方法
1. 取适量 SOC 放 37 度预热 1-2 小时（每管感受态准备 10ml SOC）。
2. 0.1 cm 电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净的吸水纸上 5 分钟，待其沥干水分，正置 5 分钟，待乙醇挥发干
净立即插入冰中，压实冰面，电击杯顶离冰面 0.5 cm 以方便盖上杯盖，冰中静置 5 分钟充分降温。
3. 取-80℃保存的 Stbl4 电击感受态细胞插入冰中 5 分钟，待其融化，加入目的 DNA (质粒或连接产物)并用手拨打 EP 管底轻轻混匀，避免产生气泡，立即插入冰中。
A. 测定转化效率使用 1 μl 10 pg/μl 的对照质粒 pUC19；
B. 对于连接产物，部分公司的 T4 连接酶体系或重组体系可与电击感受态混合后电击转化，无需进行 DNA 纯化，但
DNA 浓度不能过高，DNA 浓度不超过 100 ng/μl，体积不超过 5 μl/50 μl 感受态。
C. 对离子浓度较高的 DNA 溶液或反应体系请用膜纯化或乙醇沉淀法纯化 DNA，ddH2O 溶解后电击转化。
4. 用 200 μl 枪头(用刀切除 0.5cm 枪尖)将感受态-DNA 混合物快速移到电击杯中，避免产生气泡，盖上杯盖。
5. 启动电转仪，设置参数：C=25 μF，PC=200 Ω，V=1.8 kV，将电击杯从冰中拿出，用吸水纸擦拭表面，吸干表面 水渍，放入电转槽中，电击完成后拿出电转杯放室温，打开杯盖，15 秒内加入 0.9ml 预热的 SOC（此步骤可在电转 仪旁操作，无需在超净台操作），用 1ml 枪吹吸电击杯底部 2-3 次，混匀后转移到 50 ml 离心管（BD Falcon 50 ml 离心管等），向离心管中补加 S.O.C. 培养基至 10 ml。30℃，225 rpm 复苏 90 分钟。当质粒中含有不稳定片段时， 30℃培养可降低错误重组的概率，若转化 control pUC19 计算转化效率，则需 37℃，225 rpm 复苏 60 分钟。
6. 5000 rpm 离心一分钟收菌，重悬后取 100-200 μl 涂布到含相应抗生素的 LB 平板上（因菌量较大，若全部涂 板请选用直径 15cm 培养皿 2-5 个）。将平板倒置放于 37℃培养箱过夜培养 17-20 小时或 30℃培养箱过夜培养 20-24 小时。若转化 control pUC19 计算转化效率，则需 37℃培养过夜。
7.若要获得大量，高纯度质粒，建议在 TB 培养基（唯地 CAT#：CM1018L）中 30 度/37 度摇菌培养（以标准质 粒 PUC19 为例：在 TB 营养液中过夜培养的菌体浓度和质粒产量为 LB 的 3-4 倍，SOB 的 2 倍）
培养基配方：
S.O.C 培养基（唯地 CAT#：CM1014L）PH 7.0 | TB 培养基（唯地 CAT#：CM1018L） PH 7.2 |
2% Tryptone | 1.2% Tryptone |
0.5% Yeast Extract | 2.4% Yeast Extract |
10 mM NaCl | 0.4% 甘油 |
2.5 mM KCl | 0.231% KH2PO4 |
10 mM MgCl2 | 1.254% K2HPO4 |
10 mM MgSO4 | TB 培养基中添加 0.017M 磷酸二氢钾和 |
20 mM glucose | 0.072M 磷酸氢二钾成分，在大肠杆菌进 |
S.O.C. is suitable for use in the final step of cell transformation | 入稳定后期可以稳定培养基 ph 值，提高 |
to obtain maximal transformation efficiency (Hanahan, 1983). | 菌体密度。 |
注意事项
1. Stbl4 电击感受只能电击转化，不可用热激方法转化。加入 DNA 时体积不应大于感受态体积的 1/10。
2. 电击感受态细胞加入电击杯应避免产生气泡，气泡会增加弧光放电风险。
3. 当 DNA 不纯或存在盐，乙醇，蛋白及缓冲液等污染时，转化效率急剧下降。
4. 电击杯里的离子可增加溶液的电导，增大在含有细胞和 DNA 的溶液中产生电流和弧光放电的风险。
5. 若转化大质粒或想获得较高转化效率，推荐使用高纯质粒提取试剂盒提取质粒。质粒增大一倍，转化效率下降一个 数量级。
6. 对于连接产物，最好用膜纯化或乙醇沉淀法纯化 DNA 后用适量 ddH2O 或 TE 缓冲液 (10 mM Tris HCl, pH7.5; 1 mM EDTA)重悬产物，保证 DNA 浓度不超过 100 ng/μl。过高浓度连接产物或过大体积连接产物会降低转化效率， 增加弧光放电的风险。
7. 混入质粒时应轻柔操作，吸取感受态细胞时避免用力过猛，以免剪切力过大损伤细胞膜，降低转化效率。转化高浓 度的质粒或连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。
8. 电击感受态细胞最好保存在-80℃以下，高于-80℃超期储存会导致转化效率会下降。
