Rosetta-gami 2(DE3)化学转化感受态

Rosetta-gami 2(DE3) 化学转化感受态细胞

产品简介

本品为大肠杆菌Rosetta-gami 2(DE3)[基因型：D_(ara-leu)7697 DlacX74 Dpho_A PvuII _pho_R _ara_D_139 ahp_C gal_E gal_K rps_L (DE3) F’_[lac⁺ _lac_I^q _pro] gor522::Tn10 trx_B pRARE2 _(Cam^R, Str^R, Tet^R)_]制作的高效感受态。该菌株集合了Rosetta2和 Origami2两种菌株的优点：＊_pRARE2_赋予其Rosetta2菌株的优点----补充大肠杆菌缺乏的7种稀有密码子(AUA, AGG, AGA, CUA, CCC, GGA和CGG)对应的 tRNA，提高外源基因的表达水平。＊_gor_522::_Tn10 trxB_赋予其Origami2菌株的优点----突变的硫氧还蛋白还原酶(thioredoxin reductase) (trxB)和谷胱甘肽还原酶(glutathione reductase) (gor)基因，它们是还原途径的两个关键酶，其突变有利于高效形成正确折叠的含有二硫键的蛋白，增强蛋白的可溶性；同时该菌株不具有卡那霉素抗性，可用于具有卡那霉素抗性质粒的蛋白表达。＊该菌株染色体整合了λ噬菌体DE3区(DE3区含有T7噬菌体RNA聚合酶)适合T7启动子诱导的蛋白表达。＊Rosetta-gami 2(DE3)菌株具有氯霉素，链霉素，四环素抗性，由特殊工艺制作，经pUC19质粒（2686bp，AmpR）检测转化效率>10⁸ cfu/μg DNA。

产品规格

-80℃（12个月）

转化方法

1. 从-80 ℃冰箱中取出感受态细胞，放入冰中5 min，加入目的质粒，轻弹使混合均匀，并在冰中孵育30min；

2. 放42℃水浴锅中热激90 s，立即插入冰中静置2-3 min；

3. 添加900 μL LB液体培养基，37℃摇床220 rpm培养60 min；

4. 吸取100μL菌液均匀涂布抗性平板，37℃培养箱放置过夜。

注意事项

1. 感受态细胞解冻后应立即使用，不可在冰中放置过长时间。

2. 不能用移液器抽吸感受态细胞，用手指轻弹混匀即可。

3. 诱导蛋白表达时，IPTG 浓度可选（0.1-2 mM 均可）。