Lemo21(DE3)化学转化感受态

Lemo21(DE3) 化学转化感受态细胞

产品简介 

大肠杆菌Lemo21(DE3)感受态细胞为T7可控表达菌株，专为表达具有挑战性的重组蛋白而设计。它作为BL21(DE3)的衍生菌株，不仅继承了其特点，还能够通过改变T7溶菌酶(lysY)的水平以控制表达水平，T7溶菌酶为T7 RNA聚合酶的天然抑制剂。对蛋白表达的精准控制使得Lemo21(DE3)成为表达膜蛋白、毒性蛋白、分泌蛋白以及存在可溶性问题蛋白的理想选择。Lemo21(DE3)感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19质粒检测转化效率可达10⁸ cfu/μg DNA以上。

产品规格

基因型：fhuA2 [lon] ompT gal (λ DE3) [dcm] ?hsdS/ pLemo(CamR)DE3 = λ sBamHIo ?EcoRI-B int::(lacI::PlacUV5::T7 gene1) i21 ?nin5 pLemo = pACYC184-PrhaBAD-lysY

 保存条件

-80℃保存；请勿将本品置于-20℃或者液氮中保存。

转化方法

1. 解冻感受态细胞：从-80℃取感受态细胞，放置在冰浴或冰水浴中融化，约5-10 min，放置时间过长会影响转化效率。

2. DNA样品的转化：每100 μL感受态加入待转化DNA样品(例如质粒、连接产物或重组产物等)约10 μL，然后轻轻弹击管底约2-3次，立即冰上静置孵育30 min。

3. 热激处理：将冰浴后的离心管快速置于42℃水浴中，静置热激90 s。随后立即转移至冰水浴中静置2-3 min以快速冷却。

4. 复苏培养：加入900 μL 37℃预热的LB或SOC培养基，颠倒数次混匀，37℃摇床约220 rpm复苏培养45 min。

5. 收菌涂板：如果用于质粒的转化扩增，建议直接取50-100 μL进行涂板即可；如果用于连接产物或重组产物的转化，建议先5000 g，1 min室温离心沉淀细菌，吸除约900-950 μL上清，然后用剩余的约50-100 μL菌液重悬，涂布到含相应抗生素的LB平板上。

6. 过夜培养：将平板倒置放于37℃培养箱培养过夜。

注意事项 

1. 加入待转化DNA样品体积通常不宜超过感受态细胞体积的10%。
2. 加入待转化DNA样品后应轻柔操作，避免使用移液枪吹打混匀。
3. 如果用于质粒的转化扩增，冰浴静置约10 min后可以直接涂板并培养过夜；如果用于连接产物或重组产物的转化，建议冰浴静置30分钟并严格执行后续的热激处理和复苏培养等步骤，以提高转化效率。 

4. 热激及转移至冰浴过程中请勿晃动离心管。 

5. 培养前需要将平板在超净台中稍微晾至无明显水渍，有利于形成单克隆。