ArcticExpress(DE3) pRARE2化学转化感受态

ArcticExpress(DE3)pRARE2化学感受态细胞

产品简介

本品为大肠杆菌ArcticExpress(DE3)pRARE2{基因型：E. coli B F- _omp_T _hsd_S(rB- mB-) _dcm_+ Tet^R gal λ(DE3) _end_A Hte [_cpn_10_cpn_60 Gent^R] pRARE2 (Cam^R)}制作的感受态。该菌种来源于ArcticExpress (DE3)，将具有氯霉素抗性的pRARE2质粒导入ArcticExpress (DE3)细胞中即是ArcticExpress (DE3) pRARE2。ArcticExpress (DE3) pRARE2菌株染色体DNA中整合了λ噬菌体DE3区，使得ArcticExpress (DE3) pRARE2菌株可同时表达T7 RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶，广泛用于pET系列，pGEX，pMAL等质粒的蛋白表达。ArcticExpress (DE3) pRARE2 菌株具有四环素，庆大霉素，氯霉素抗性，_end_A1突变有利于质粒DNA的稳定。[cpn10cpn60 GentR]的存在使ArcticExpress (DE3) pRARE2可以表达适应低温的伴侣蛋白Cpn10和Cpn60（来自嗜冷菌--Oleispira antarctica）。Cpn10和Cpn60 伴侣蛋白在4-12℃表现出较高活性，在ArcticExpress(DE3) pRARE2细胞中表达时，可降低重组蛋白包涵体的形成，增加可溶重组蛋白的表达量及生物活性，比传统的原核表达伴侣蛋白GroEL、GroES等具有更加优异的促融能力。同时，pRARE2质粒可补充大肠杆菌缺乏的7种稀有密码子(AUA, AGG, AGA, CUA,CCC, GGA和CGG)对应的tRNA，提高外源基因的表达水平。ArcticExpress (DE3) pRARE2感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19质粒（2686bp，Amp^R）检测转化效率>10⁸cfu/μg DNA。

产品规格

-80℃（12个月）

转化方法

1. 从-80 ℃冰箱中取出感受态细胞，放入冰中5 min，加入目的质粒，轻弹使混合均匀，并在冰中孵育30min；

2. 放42℃水浴锅中热激90 s，立即插入冰中静置2-3 min；

3. 添加900 μL LB液体培养基，37℃摇床220 rpm培养60 min；

4. 吸取100μL菌液均匀涂布抗性平板，37℃培养箱放置过夜。

注意事项

1. 感受态细胞解冻后应立即使用，不可在冰中放置过长时间。

2. 不能用移液器抽吸感受态细胞，用手指轻弹混匀即可。

3. 诱导蛋白表达时，IPTG 浓度可选（0.1-2 mM 均可）。