T7 Express化学转化感受态细胞td

T7 Express 化学转化感受态细胞

产品简介

T7 Express 菌株为大肠杆菌 BL21 增强型菌株,为 Lon 和 OmpT 蛋白酶缺陷型,主要适用于含有 T7 启动 子的原核表达载体(如 pET 等)的蛋白表达,同样适用于需要大肠杆菌 RNA 聚合酶来转录 RNA 的非 T7 启动 子的表达载体(如 pGEX 等)。该菌株区别于 BL21(DE3)菌株的优势在于 T7 RNA 聚合酶基因整合在细菌染色 体上的 lac 操纵子区域,基因组中无λ前噬菌体序列,并具有抗 T1 噬菌体感染等特点。T7 表达感受态细胞经 特殊工艺制作,pUC19 质粒检测转化效率大于 108  cfu/μg。

产品规格

储存条件:-70℃保存,避免反复冻融。

基因型:

f_huA__2_ lacZ::T7 gene__1 _[_lon__] ompT gal _sulA__11 R(_mcr__- _73::__miniTn__10--Tet__S)2 [__dcm__] R(_zgb__-210::Tn__1__0--Tet__S) endA1 (mcrCmrr)114::IS10

菌株抗性:对氨苄青霉素,卡那霉素,壮观霉素,氯霉素,链霉素和四环素敏感。

转化说明

1.  将感受态细胞置于冰水浴中化冻。待细胞刚化冻后,加入质粒 DNA 或 5- 10μl 连接产物到细胞中,用手 指拨打管底,轻轻混匀;

2.  冰水浴中放置 30 分钟,不要晃动;

3. 42℃热击 60 秒钟,不要晃动;

4.  冰水浴中放置 2 分钟,不要晃动;

5.  加入 500μl 无菌的 SOC 或 LB 培养基;

6.  置于 37℃摇床中,150-200rpm 震荡复苏培养 60 分钟;

7.  取 50- 100μl 菌液涂布在含有抗性的 LB 平板上。待液体吸干后,倒置平板,37℃培养 12- 16 小时。

(平板划线分离法:复苏培养结束后,12000rpm 离心 30 秒钟,弃掉上清,留 100μl 左右的液体,用 200μl 吸 头轻轻吹打散菌块,取 10μl 重悬的菌液分多点滴在平板上,倾斜吸头,用吸头头部的侧面将滴在平板上的 液体来回划线。这个方法可以获得更多更大的单克隆菌落。)

(质粒快速转化步骤:将步骤 2 的时间缩短到 5 分钟,对于氨苄青霉素抗性的质粒,步骤 4 完成后,可直接涂

布或划线于含氨苄青霉素抗性的 LB 平板上。其它抗性的质粒仍需 60 分钟的复苏培养。)

1.  挑取单菌落,接种到含 5ml 带抗生素的 LB 培养基中;

2. 37℃, 200rpm 震荡培养细菌至对数生长期(OD600=0.4-0.8);

3.  加入 IPTG 到终浓度为 0.4mM ,37℃诱导 2-4 小时或 16℃诱导过夜;

4.  诱导完成后,离心收集菌体,用合适的方法(如考马斯亮蓝染胶法,Western-Blot法或酶活性分析法)

分析菌体裂解物的总蛋白、上清和沉淀组分,明确表达产物的表达状况(可溶性或不溶性表达);

5.  大量表达时,可用10ml 过夜培养物转接到1L 培养基中,当培养到OD600=0.4-0.8 时,加入终浓度为0.4mM  的 IPTG,37℃诱导 2-4 小时或 16℃诱导过夜(不同蛋白表达的 条件有所不同,需在实验中优化)。