OrigamiB(DE3)pLysS化学转化感受态

OrigamiB(DE3) pLysS 化学转化感受态细胞

产品简介     

本品为大肠杆菌OrigamiB(DE3) pLysS{基因型：F^-_omp_T _hsd_S_B(r_B^-m_B^-) _ga_l _dcm lac_Y1 _ahp_C (DE3) _gor_522::_Tn_10 _trx_B (Kan^R,Tet^R) pLysS Cam^R}制作的感受态。该菌株携带pLysS质粒，具有氯霉素抗性。pLysS可表达T7溶菌酶（T7溶菌酶可以作用于大肠杆菌细胞壁上的肽聚糖溶解大肠杆菌，还可与T7 RNA聚合酶结合抑制其转录活性，进而降低目的基因的背景表达水平，但不干扰IPTG 诱导的表达），适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。Origami B(DE3) pLysS菌株表达突变的硫氧还蛋白还原酶 (thioredoxin reductase) (trxB)和谷胱甘肽还原酶(glutathione reductase) (gor)，这两个酶是还原途径的关键酶，突变后有利于形成正确折叠的含有二硫键的蛋白，增强蛋白的可溶性。此外，该菌株染色体整合了λ噬菌体DE3区(DE3区含有T7噬菌体RNA聚合酶)，可同时表达T7 RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶，可用于pET系列，pGEX，pMAL等质粒的蛋白表达，具有氯霉素、卡那霉素和四环素抗性，不能用于具有氯霉素，卡那霉素抗性质粒的表达。Origami B (DE3) pLysS感受态细胞由特殊工艺制作，pUC19质粒（2686bp，Amp^R）检测转化效率>10⁸ cfu/μg DNA。

产品规格

保存条件：-80℃（12个月）

转化方法 1. 从-80 ℃ 冰箱中取出感受态细胞，放入冰中5 min，加入目的质粒，轻弹使混合均匀，并在冰中孵育30min； 2. 放42℃ 水浴锅中热激90 s，立即插入冰中静置2-3 min；  3. 添加900 μL LB液体培养基，37℃ 摇床200 rpm培养60 min； 4. 吸取100μL菌液均匀涂布抗性平板（若质粒浓度较高，需要稀释后涂板），37℃ 培养箱放置过夜。

注意事项 

1. 感受态细胞解冻后应立即使用，不可在冰中放置过长时间。

2. 不能用移液器抽吸感受态细胞，用手指轻弹混匀即可。

3. 诱导蛋白表达时，IPTG 浓度可选（0.1-2 mM 均可）。