PIR2化学转化感受态
PIR2化学感受态细胞产品描述大肠杆菌PIR1和PIR2可用于复制含有R6Kγ复制子的载体；pir基因编码复制蛋白π，该菌株带有的pir基因突变能够帮助维持和复
PIR2化学感受态细胞产品描述大肠杆菌PIR1和PIR2可用于复制含有R6Kγ复制子的载体；pir基因编码复制蛋白π，该菌株带有的pir基因突变能够帮助维持和复
PIR2化学感受态细胞
产品描述
大肠杆菌PIR1和PIR2可用于复制含有R6Kγ复制子的载体；pir基因编码复制蛋白π，该菌株带有的pir基因突变能够帮助维持和复制含有R6Kγ复制子的质粒。经pUC19质粒转化检测，PIR2感受态细胞的转化效率可达108 cfu/μg DNA以上。
产品规格
品名 | 规格 |
PIR2 化学转化感受态 | 10×100 μL |
50×100 μL |
保存条件：-80℃（12个月）
操作流程
1. 解冻感受态细胞：从-80℃取感受态细胞，放置在冰浴或冰水浴中融化，约5-10 min，放置时间过长会影响转化效率。
2. DNA样品的转化：每100 μL感受态加入待转化DNA样品(例如质粒、连接产物或重组产物等)约10 μL，然后轻轻弹击管底约2-3次，立即冰上静置孵育30 min。
- 加入待转化DNA样品体积通常不宜超过感受态细胞体积的10%。
- 加入待转化DNA样品后应轻柔操作，避免使用移液枪吹打混匀。
-如果用于质粒的转化扩增，冰浴静置约10 min后可以直接涂板并培养过夜；如果用于连接产物或重组产物的转化，建议冰浴静置30分钟并严格执行后续的热激处理和复苏培养等步骤，以提高转化效率。
3. 热激处理：将冰浴后的离心管快速置于42℃水浴中，静置热激90 s。随后立即转移至冰水浴中静置2-3 min以快速冷却。
-热激及转移至冰浴过程中请勿晃动离心管。
4. 复苏培养：加入900 μL 37℃预热的LB或SOC培养基，颠倒数次混匀，37℃摇床约220 rpm复苏培养45 min。
5. 收菌涂板：如果用于质粒的转化扩增，建议直接取50-100 μL进行涂板即可；如果用于连接产物或重组产物的转化，建议先5000 g，1 min室温离心沉淀细菌，吸除约900-950 μL上清，然后用剩余的约50-100 μL菌液重悬，涂布到含相应抗生素的LB平板上。
6. 过夜培养：将平板倒置放于37℃培养箱培养过夜。
7. 培养前需要将平板在超净台中稍微晾至无明显水渍，有利于形成单克隆。
