Origami2(DE3)pLysS化学转化感受态

Origami2(DE3)pLysS 化学转化感受态细胞

产品简介

本品为大肠杆菌Origami2(DE3)pLysS{基因型：Δ(_ara_-leu)7697 Δ_lac_X74 Δ_pho_A P_vuII pho_R _ara_D139 _ahp_C _gal_E _gal_K _rps_L F′[lac⁺ _lac_I^q _pro_] (DE3) gor522::Tn10 _trx_B pLysS (Cam^R, Str^R, Tet^R) }制作的感受态。该菌株是K-12的衍生菌株，含有突变的硫氧还蛋白还原酶(thioredoxin reductase) (trxB)和谷胱甘肽还原酶(glutathione reductase) (gor)基因，它们是还原途径的两个关键酶，其突变有利于含有二硫键蛋白的正确折叠，增强蛋白的可溶性；同时该菌株不具有卡那霉素抗性，可用于具有卡那霉素抗性质粒的蛋白表达。Origami2(DE3)pLysS菌株染色体整合了λ噬菌体DE3区(DE3 区含有T7噬菌体RNA聚合酶)，该区整合于大肠杆菌的染色体上，可同时表达T7 RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶，用于pET系列，pGEX，pMAL 等质粒的蛋白表达，该菌株携带的pLysS质粒含有表达T7溶菌酶的基因，能够降低目的基因的背景表达水平，但不干扰 IPTG诱导的表达，适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。Origami2(DE3)pLysS菌株具有氯霉素，链霉素，四环素抗性，为亮氨酸生长缺陷型菌株。Origami2(DE3)pLysS感受态细胞由特殊工艺制作，pUC19质粒（2686bp，Amp^R）检测转化效率>10⁶ cfu/μg DNA。

产品规格

保存条件：-80℃（12个月）

转化方法

1. 从-80 ℃ 冰箱中取出感受态细胞，放入冰中5 min，加入目的质粒，轻弹使混合均匀，并在冰中孵育30min；

2. 放42℃ 水浴锅中热激90 s，立即插入冰中静置2-3 min；

3. 添加900 μL LB液体培养基，37℃ 摇床200 rpm培养60 min；

4. 吸取100μL菌液均匀涂布抗性平板（若质粒浓度较高，需要稀释后涂板），37℃ 培养箱放置过夜。

注意事项

1. 感受态细胞解冻后应立即使用，不可在冰中放置过长时间。

2. 不能用移液器抽吸感受态细胞，用手指轻弹混匀即可。

3. 诱导蛋白表达时，IPTG 浓度可选（0.1-2 mM 均可）。