Origami2(DE3)化学转化感受态
Origami2(DE3) 化学转化感受态细胞产品简介本品为大肠杆菌Origami2(DE3){基因型：Δ_(_ara_-leu)7697 Δ_lac_X74
Origami2(DE3) 化学转化感受态细胞产品简介本品为大肠杆菌Origami2(DE3){基因型：Δ_(_ara_-leu)7697 Δ_lac_X74
产品简介
本品为大肠杆菌Origami2(DE3){基因型：Δ_(_ara_-leu)7697 Δ_lac_X74 Δ_pho_A P_vuII _pho_R _ara_D139 _ah_pC _gal_E _gal_K _rps_L F′[lac+ _lac_Iq _pro_] (DE3) _gor522::_Tn10 _trx_B (StrR, TetR) }制作的感受态。该菌株是K-12的衍生菌株，含有突变的硫氧还蛋白还原酶(thioredoxin reductase) (trxB)和谷胱甘肽还原酶(glutathione reductase) (gor)基因，它们是还原途径的两个关键酶，其突变有利于含有二硫键蛋白的正确折叠，增强蛋白的可溶性；同时该菌株不具有卡那霉素抗性，可用于具有卡那霉素抗性质粒的蛋白表达。Origami2(DE3)菌株染色体整合了λ噬菌体DE3区(DE3区含有T7噬菌体RNA聚合酶)，该区整合于大肠杆菌的染色体上，可同时表达T7RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶，用于pET系列，pGEX，pMAL等质粒的蛋白表达，Origami2(DE3) 菌株具有链霉素，四环素抗性，为亮氨酸生长缺陷型菌株。Origami2(DE3)感受态细胞由特殊工艺制作，pUC19质粒（2686bp，AmpR）检测转化效率>106 cfu/μg DNA。
产品规格
品名 | 规格 |
Origami2(DE3)化学转化感受态 | 10×100 μL |
50×100 μL |
保存条件：-80℃（12个月）
转化方法
1. 从-80 ℃冰箱中取出感受态细胞，放入冰中5 min，加入目的质粒，轻弹使混合均匀，并在冰中孵育30min；
2. 放42℃水浴锅中热激90 s，立即插入冰中静置2-3 min；
3. 添加900 μL LB液体培养基，37℃摇床200 rpm培养60 min；
4. 吸取100μL菌液均匀涂布抗性平板（若质粒浓度较高，需要稀释后涂板），37℃培养箱放置过夜。
注意事项
1. 感受态细胞解冻后应立即使用，不可在冰中放置过长时间。
2. 不能用移液器抽吸感受态细胞，用手指轻弹混匀即可。
3. 诱导蛋白表达时，IPTG 浓度可选（0.1-2 mM 均可）。
