ET12567(pUZ8002)化学转化感受态

ET12567(pUZ8002)化学感受态细胞

产品介绍:

本公司生产的 ET12567 化学感受态细胞是经特殊工艺处理得到的感受态细胞，可用于 DNA 的化学转化。使 用 pUC19 质粒 DNA 检测，转化效率高达 106cfu/μg DNA 以上。

ET12567(pUZ8002)在培养的过程中加入25μg/ml氯霉素和25μg/ml卡那霉素有助于维持细胞内的伴侣质粒 存在。ET12567(pUZ8002)主要用来进行链霉菌基因操作过程中，利用结合转移的方法将基因导入到链霉菌中，链霉 菌基因敲除或者基因倍增过程中全球通用和认可的菌株。

ET12567(pUZ8002)是甲基化缺陷型菌株。大部分链霉菌能够通过甲基修饰系统区分出自身DNA和外来DNA， 所以需要转入到链霉菌中的质粒都必须利用ET12567(pUZ8002)通过结合转移的方法进入链霉菌体内。如果使用的 链霉菌不含有甲基化修饰系统，那么使用DH5α(pUZ8002)菌株也是可以完成结合转移的。

pUZ8002质粒含有tra基因，能够编码转移蛋白Tra，从而实现基因DNA转移。 ET12567(pUZ8002)配套使用载体是pSET152和pKC1139。

基因型为：F- dam-13::Tn9 dcm-6 hsdM hsdR zjj-202::Tn10 recF143 galK2 galT22 ara-14 lacY1 xyl-5 leuB6 thi-1 tonA31 rpsL136 hisG4 tsx-78 mtl-1 glnV44

产品规格:

保存条件：-80℃（12个月）;请勿将本品置于-20 ℃或者液氮中保存。

操作步骤 :

以下操作均按无菌条件的标准进行 :

■ 转化：取感受态细胞置于冰浴中（解冻 1-2 分钟），加入目的 DNA，轻轻混匀，在冰浴中放置 30 分钟。

注意：所使用 DNA 体积不要超过感受态细胞悬液体积的 1/10，100μl 感受态细胞能够被 1ng 超螺旋质粒 DNA 所饱和。

■ 热激：将离心管置于 42℃水浴中放置 60-90 秒，然后快速将管转移到冰浴中，使细胞冷却 2-3 分钟，该过程不要摇动离心管。

■ 复苏：向每个离心管中加入 500μl 无菌的 SOC 或 LB 培养基（不含抗生素），混匀后置于 37℃ 180rpm 摇床振荡培养 45-60 分钟，目的是使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。

■ 涂板：根据实验要求（质粒，重组连接产物转化），吸取适量体积已转化的感受态细胞加到含相 应抗生素的 SOC 或 LB 固体琼脂培养基上，将细胞均匀涂开。将平板置于室温直至液体 被吸收，倒置平板，37℃培养 12-16 小时。

操作提示 :

. 刚刚化冻的细胞，转化效率最高。化冻后感受态细胞冰浴条件下，半小时内活性无明显变化，因 此，同时转化多支感受态细胞时尽量半小时内加完目的  DNA。

.  感受态细胞应保存在  -70℃，请避免反复冻融，以免降低感受态细胞的转化效率。

.  进行转化操作时，请在无菌条件下，根据相应温度要求进行实验。

.  避免用移液枪吹吸，整个过程要轻柔，尽量低温操作。

.  为防止转化实验不成功，可以保留部分连接反应液，以重新转化，将损失降到最低。

.由于此感受态细胞转化效率较低；为了更好的实验效果，建议至少转入 100ng 以上质粒，取 1/3 以上复苏后菌液涂板；否则有可能转化失败。