TOP10化学转化感受态

TOP10 化学转化感受态细胞

产品简介

TOP10菌株来源于MC1061菌株，是目前实验室较常用的菌株之一，广泛用于基因克隆、蓝白筛选、质粒稳定扩增等分子生物学实验。其生长速度较快(比DH5α快，但比Mach1-T1慢)，约10小时可见克隆。其基因型与DH10B高度类似(DH10B为galE15型，而TOP10为galU型)。其中hsdR用于有效转化通过PCR扩增获得的未甲基化DNA；lacZΔM15的表达使TOP10感受态可用于蓝、白斑筛选；recA1可减少插入片段的同源重组概率，保证了插入DNA的稳定性；endA1的突变提高了质粒DNA的产量和质量；StrR使得该菌株具有链霉素抗性。经pUC19质粒转化检测，转化效率可达10⁸ cfu/μg DNA以上。

产品规格

保存条件：-80℃（12个月）

基因型：F- mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80 lacZΔM15 ΔlacX74 recA1 araD139 Δ(ara-leu)7697 galU galK rpsL (StrR) endA1 nup*G 保存条件

转化方法

1. 解冻感受态细胞：从-80℃取感受态细胞，放置在冰浴或冰水浴中融化，约5-10 min，放置时间过长会影响转化效率。

2. DNA样品的转化：每100 μL感受态加入待转化DNA样品(例如质粒、连接产物或重组产物等)约10 μL，然后轻轻弹击管底约2-3次，立即冰上静置孵育30 min。

3. 热激处理：将冰浴后的离心管快速置于42℃水浴中，静置热激90 s。随后立即转移至冰水浴中静置2-3 min以快速冷却。

4. 复苏培养：加入900 μL 37℃预热的LB或SOC培养基，颠倒数次混匀，37℃摇床约220 rpm复苏培养45 min。

5. 收菌涂板：如果用于质粒的转化扩增，建议直接取50-100 μL进行涂板即可；如果用于连接产物或重组产物的转化，建议先5000 g，1 min室温离心沉淀细菌，吸除约900-950 μL上清，然后用剩余的约50-100 μL菌液重悬，涂布到含相应抗生素的LB平板上。

6. 过夜培养：将平板倒置放于37℃培养箱培养过夜。

注意事项 

1. 加入待转化DNA样品体积通常不宜超过感受态细胞体积的10%。
2. 加入待转化DNA样品后应轻柔操作，避免使用移液枪吹打混匀。
3. 如果用于质粒的转化扩增，冰浴静置约10 min后可以直接涂板并培养过夜；如果用于连接产物或重组产物的转化，建议冰浴静置30分钟并严格执行后续的热激处理和复苏培养等步骤，以提高转化效率。 

4. 热激及转移至冰浴过程中请勿晃动离心管。 培养前需要将平板在超净台中稍微晾至无明显水渍，有利于形成单克隆。