EPI400化学转化感受态
EPI400 感受态细胞产品简介本品为大肠杆菌EPI400（基因型：F- _mcr_A Δ(_mrr-hsd_RMS-_mcr_BC) _Φ80dlac_ZΔM
EPI400 感受态细胞产品简介本品为大肠杆菌EPI400（基因型：F- _mcr_A Δ(_mrr-hsd_RMS-_mcr_BC) _Φ80dlac_ZΔM
产品简介
本品为大肠杆菌EPI400（基因型：F- _mcr_A Δ(_mrr-hsd_RMS-_mcr_BC) _Φ80dlac_ZΔM15 Δ_lac_X74 _rec_A1 _end_A1 _ara_D139 Δ(ara, leu)7697 _gal_U _gal_K λ- _rps_L (StrR) _nup_G _trf_A _ton_A _pcn_B4 _dhfr_）制作的高效感受态，来源于EC100菌株，将EC100核基因中控制质粒拷贝数的pcnB基因删除后引入一个诱导启动子驱动的pcnB基因，即是EPI100菌株。EPI400菌株可以降低质粒的拷贝数，特别适合于各种不稳定DNA或毒性基因的克隆，在加入WDEPI-诱导剂 I后又可以提高质粒产量到正常状态。[_mcr_A,Δ(_mrr_-_hsd_RMS-_mcr_BC)]基因型使EPI400菌株适合于克隆富含甲基胞嘧啶或甲基腺嘌呤的DNA 。recA1和endA1的突变有利于插入DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。lacZΔM15标记的存在使EPI400可用于蓝白斑筛选，tonA赋予其抗噬菌体T1和T5的能力，rpsL赋予其链霉素抗性。EPI400感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19质粒（2686bp，AmpR）检测转化效率>5×107 cfu/μg DNA。
产品规格
品名 | 规格 |
EPI400化学转化感受态 | 10×100 μL |
50×100 μL |
保存条件：-80℃（12个月）
转化方法
1. 从-80 ℃冰箱中取出感受态细胞，放入冰中5 min，加入目的质粒或连接产物，轻弹使混合均匀，并在冰中孵育30min；
2. 放42℃水浴锅中热激90 s，立即插入冰中静置2-3 min；
3. 添加900 μL LB液体培养基，37℃摇床220 rpm培养60 min；
4. 离心（质粒转化无需离心，吸取100μL菌液涂布即可），倒掉上清，余下菌液均匀涂布抗性平板，37℃培养箱放置过夜。
注意事项
1. 感受态细胞解冻后应立即使用，不可在冰中放置过长时间。
2. 不能用移液器抽吸感受态细胞，用手指轻弹混匀即可。
3. 质粒使用量<50 ng即可获得很好的转化。
