TtAgo 核酸内切酶
来源于重组大肠杆菌,含有从嗜热链球菌(Thermus thermophilus)中克隆的Argonaute(Ago)核酸酶基因,是一种依托引导序列(guide DNA)与靶核酸碱基互补配对,继而特异识别并剪切靶核酸的核酸内切酶。
TtAgo核酸内切酶(TtAgo Endonuclease)来源于重组大肠杆菌,含有从嗜热链球菌(Thermus thermophilus)中克隆的Argonaute(Ago)核酸酶基因,是一种依托引导序列(guide DNA)与靶核酸碱基互补配对,继而特异识别并剪切靶核酸的核酸内切酶。TtAgo核酸内切酶在5’磷酸化的 guide DNA(大于15 nt)引导下精准剪切单链DNA底物,剪切位点位于与引导序列互补的5’端开始的第10和11个核苷酸之间,剪切不受靶标序列和剪切位点相邻序列限制。
产品概述
TtAgo核酸内切酶(TtAgo Endonuclease)来源于重组大肠杆菌,含有从嗜热链球菌(Thermus thermophilus)中克隆的Argonaute(Ago)核酸酶基因,是一种依托引导序列(guide DNA)与靶核酸碱基互补配对,继而特异识别并剪切靶核酸的核酸内切酶。TtAgo核酸内切酶在5’磷酸化的 guide DNA(大于15 nt)引导下精准剪切单链DNA底物,剪切位点位于与引导序列互补的5’端开始的第10和11个核苷酸之间,剪切不受靶标序列和剪切位点相邻序列限制。
产品组分
组分 | 体积 | 数量 |
TtAgo Endonuclease(1μM) | 50 μL | 1 x 50 pmol |
TtAgo Endonuclease Reaction Buffer1(10x) | 1 mL | 1 x 1 ml |
运输与保存方法
-20℃及以下运输及保存,长期保存建议放-80℃。
效期
-20℃ 及以下 24 个月。
实验流程
体外切割单链 DNA 操作方法:
1.按顺序配置反应体系
试剂 | 体积 |
1μM ssDNA | 1 μL |
5μM guide DNA | 1 μL |
Reaction Buffer1(10×) | 2 μL |
TtAgo(1μM) | 1 μL |
Nuclease-free H2O | up to 20 μL |
▲一般使用 20 μL 体系,但也可以等比例放大。
▲实验前请根据使用说明用无核酸酶水将ssDNA 与 guide DNA 稀释到相应浓度。
▲请使用无核酸酶水的耗材与试剂。
2.85℃孵育 30 min,每隔 15S 采集荧光信号(图一)。
3.反应产物可直接进行核酸胶电泳分析(图二)。
▲ 如果不立即电泳,可以加入 EDTA 终止反应。
结果图示
图一:酶活检测曲线图 | 图二:酶活检测电游图 |
自备材料
试剂:Nuclease-free H2O
guide DNA(序列 5’ P-TTTGGAGCTGGTGGCG 3’)
ss DNA(序列 5’ 6-FAM-CCTACGCCACCAGCTCCAACTACCACAA-BHQ1 3’)
仪器:PCR 仪器(ABI7500、 QuantStudio 5、Stepone plus)、金属浴或水浴锅 RNase free EP 管