TtAgo 核酸内切酶
来源于重组大肠杆菌，含有从嗜热链球菌（Thermus thermophilus）中克隆的Argonaute（Ago）核酸酶基因，是一种依托引导序列（guide DNA）与靶核酸碱基互补配对，继而特异识别并剪切靶核酸的核酸内切酶。
TtAgo核酸内切酶（TtAgo Endonuclease）来源于重组大肠杆菌，含有从嗜热链球菌（Thermus thermophilus）中克隆的Argonaute（Ago）核酸酶基因，是一种依托引导序列（guide DNA）与靶核酸碱基互补配对，继而特异识别并剪切靶核酸的核酸内切酶。TtAgo核酸内切酶在5’磷酸化的 guide DNA（大于15 nt）引导下精准剪切单链DNA底物，剪切位点位于与引导序列互补的5’端开始的第10和11个核苷酸之间，剪切不受靶标序列和剪切位点相邻序列限制。
产品概述
TtAgo核酸内切酶（TtAgo Endonuclease）来源于重组大肠杆菌，含有从嗜热链球菌（Thermus thermophilus）中克隆的Argonaute（Ago）核酸酶基因，是一种依托引导序列（guide DNA）与靶核酸碱基互补配对，继而特异识别并剪切靶核酸的核酸内切酶。TtAgo核酸内切酶在5’磷酸化的 guide DNA（大于15 nt）引导下精准剪切单链DNA底物，剪切位点位于与引导序列互补的5’端开始的第10和11个核苷酸之间，剪切不受靶标序列和剪切位点相邻序列限制。
产品组分
组分 | 体积 | 数量 |
TtAgo Endonuclease（1μM） | 50 μL | 1 x 50 pmol |
TtAgo Endonuclease Reaction Buffer1（10x） | 1 mL | 1 x 1 ml |
运输与保存方法
-20℃及以下运输及保存，长期保存建议放-80℃。
效期
-20℃ 及以下 24 个月。
实验流程
体外切割单链 DNA 操作方法：
1.按顺序配置反应体系
试剂 | 体积 |
1μM ssDNA | 1 μL |
5μM guide DNA | 1 μL |
Reaction Buffer1(10×) | 2 μL |
TtAgo（1μM） | 1 μL |
Nuclease-free H2O | up to 20 μL |
▲一般使用 20 μL 体系，但也可以等比例放大。
▲实验前请根据使用说明用无核酸酶水将ssDNA 与 guide DNA 稀释到相应浓度。
▲请使用无核酸酶水的耗材与试剂。
2.85℃孵育 30 min，每隔 15S 采集荧光信号（图一）。
3.反应产物可直接进行核酸胶电泳分析（图二）。
▲ 如果不立即电泳，可以加入 EDTA 终止反应。
结果图示
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图一：酶活检测曲线图 | 图二：酶活检测电游图 |
自备材料
试剂：Nuclease-free H2O
guide DNA（序列 5’ P-TTTGGAGCTGGTGGCG 3’）
ss DNA（序列 5’ 6-FAM-CCTACGCCACCAGCTCCAACTACCACAA-BHQ1 3’）
仪器：PCR 仪器（ABI7500、 QuantStudio 5、Stepone plus）、金属浴或水浴锅 RNase free EP 管
