Cas14a1(Un1Cas12f1)
即 Un1Cas12f1, 是依赖于crRNA和tracrRNA共同介导的(或融合后的sgRNA单独介导的)DNA核酸内切酶，能特异结合并切割靶标ssDNA，且不受PAM位点的限制。
Cas14a1，即 Un1Cas12f1, 是依赖于crRNA和tracrRNA共同介导的(或融合后的sgRNA单独介导的)DNA核酸内切酶，能特异结合并切割靶标ssDNA，且不受PAM位点的限制。此外，Cas14a1也能以PAM依赖的方式特异地剪切靶标dsDNA，使DNA双链断裂并生成粘性末端。Cas14a1蛋白同样拥有针对ssDNA的反式切割活性(即旁路剪切活性/附属剪切活性)，双链或单链DNA靶标均能激活Cas14a1的反式剪切活性，即当Cas14a1蛋白与sgRNA、靶标DNA结合形成三元复合物后，便会被激活针对非特异序列ssDNA的反式剪切活性，将体系中的任意序列ssDNA切碎。相比于其他的Cas蛋白，Cas14a1蛋白的分子量普遍较小(400~700AA)，其中Un1Cas12f1的分子量约61.5 kD，可用于靶标核酸的分子检测。
Cas14a sgRNA由tracrRNA, crRNA和Spacer 构成。sgRNA与Cas14a结合，形成功能复合物，
被目标序列特异性激活。
Cas14a sgRNA scaffold sequence结构序列: 5’-3’:
CUUCACUGAUAAAGUGGAGAACCGCUUCACCAAAAGCUGUCCCUUAGGGGAUUAGAACUUGAG
UGAAGGUGGGCUGCUUGCAUCAGCCUAAUGUCGAGAAGUGCUUUCUUCGGAAAGUAACCCUC
GAAACAAAUUCAUUUUUCCUCUCCAAUUCUGCACAAGAAAGU UGCAGAACCCGAAUAGACGAAUGAAGGAAUGCAAC
推荐搭配 CRISPR HighYield sgRNA体外转录Kit 制备sgRNA。
组分 | E0819H1 (100 pmol) | E0819H3(1,000 pmol) |
Cas14a1 Nuclease (10 μM) | 100 pmol | 1,000 pmol |
10 × Cas14a1 Reaction Buffer | 1 mL | 1 mL |
Cas14a1 Nuclease 1000 pmol规格的浓度为10 μM，即10 pmol/μL，1000 pmol规格的总体积为100 μL
名称 | 推荐用量/终浓度 | 优化范围 |
10 × Cas14a1 Reaction Buffer | 1 × | - |
Reporter (fluorescence） | 120 nM | 40 ~ 160 nM |
crRNA | 50 nM | 40 ~ 160 nM |
Cas14a1 蛋白 | 50 nM | 40 ~ 160 nM |
上一步反应的扩增产物 | 适量 | 0-5ul |
H2O | 补齐到 20 μL | - |
组分-20℃储存；≤ 0℃运输。
